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离心机怎么提取乳酸脱氢酶及辅酶?

日期:2021年04月06日   信息来源:www.zjgstyjx.com

  离心机可以应用于乳酸脱氢酶及辅酶的提取。乳酸脱氢酶,是一种不需氧脱氢酶,以辅酶I(NAD﹢)为辅酶,催化乳酸与丙酮酸的可逆的氧化还原反应。肌肉中含有大量的乳酸脱氢酶,在乳酸含量较高及氧气充足情况下,催化乳酸生成丙酮酸,体外实验中,为观察方便,在隔绝空气后以甲烯蓝作为受氢体,井用固定反应中生成的丙酮酸,而使乳酸全部转化为丙酮酸。今天我们对如何通过离心机提取乳酸脱氢酶及辅酶I进行介绍。
 
  通过离心提取乳酸脱氢酶及辅酶用到的材料、试剂及设备有:(1)动物后腿肌肉;(2)9g/LNaCl溶液;(3)活性炭;(4)10g/L乳酸锂溶液;(5)5g/LKCN溶液;(6)乳钵;(7)离心机等
 
  具体操作方法:
 
  1.辅酶I(NAD﹢)的制备:取动物后腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分钟(抑制酶的活力,防止将辅酶I破坏),取出冷却、剪碎,加入少许9g/LNaCl溶液及细沙用乳钵研磨成糊状,再加9g/LNaCl溶液8ml混匀,利用离心机进行离心沉淀,收集上清液,储冰箱备用。
 
  2.乳酸脱氢酶酶蛋白的提取:取动物后腿肌肉2g置乳钵中,加入少许9g/LNaCl溶液及细砂,仔细研磨后再加9g/LNaCl溶液8ml混匀,用双层纱布过滤,滤液加活性炭0.5g振摇数分钟后放置半小时,并时常摇动,然后通过离心机离心分离,取上清液备用。

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